Clickchemistrytools货号1037产品DBCO Magnetic Beads操作说明

一、产品基础信息

• 货号：1037?1（1 mL），1037?5（5      mL）

• 浓度：10 mg/mL，粒径 0.8–1 μm，DBCO 基团密度≥30 nmol/mg

• 反应原理：无铜点击化学（SPAAC），DBCO 特异性与叠氮（?N?）标记蛋白 / 分子共价偶联

• 用途：捕获富集叠氮修饰蛋白、免疫沉淀、细胞分选、蛋白互作、神经 / 巨噬细胞相关蛋白纯化

• 储存：2–8 ℃，严禁冻存，使用前颠倒充分重悬

二、推荐缓冲液（通用）

• 结合 / 洗涤缓冲液：PBS（pH 7.2–7.4），可加 0.01% Tween?20、1% BSA 降低非特异结合

• 禁止：高浓度尿素、强还原剂、含游离叠氮离子体系

三、标准操作步骤（捕获叠氮标记蛋白）

1. 磁珠预处理（关键）

1.1取所需体积磁珠（常规 20–50 μL，200–500 μg），摩尔比为磁珠与叠氮分子（如1:1至5:1）

磁力架上静置 1–2 min，弃上清

1.2加入等量 PBS 洗涤，吹打重悬，磁分离弃上清，重复 2 次

1.3用结合缓冲液重悬磁珠备用

2. 结合反应（无铜、温和条件）

2.1加入叠氮标记的蛋白 / 细胞裂解液样本

2.2室温旋转孵育1–2 h；或 4 ℃旋转过夜，效率更高

2.3磁分离，弃未结合上清

3.洗涤去除杂蛋白

3.1PBS?T（含 0.01% Tween?20）洗涤3 次，每次充分重悬→磁分离弃上清，去除非特异吸附

4. 目标分子洗脱 / 下游应用

4.1蛋白 WB / 质谱：加 SDS 上样缓冲液，95 ℃煮沸 5–10 min，磁分离取上清

4.2保留磁珠?蛋白复合物：直接用于后续共沉淀、互作检测

四、关键注意事项

• 全程禁止铜离子，否则破坏无铜点击反应

• 磁珠易聚集，每次使用前充分颠倒重悬，禁止剧烈高速离心

• 样本 pH 维持 6–8，避免强酸强碱

• 洗涤充分，降低背景，适配低丰度蛋白检测